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Elisa試劑盒試驗(yàn)原理

2021-07-27 [1837]

Elisa試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大白鼠類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)水平。用純化的大白鼠類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中順次加入類(lèi)風(fēng)濕因子(RF),再與 HRP 符號(hào)的類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)抗體結(jié)合,構(gòu)成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗刷后加底物 TMB 顯。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán),并在酸的效果下轉(zhuǎn)化成終究的黃。彩的深淺和樣品中的類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),經(jīng)過(guò)規(guī)范曲線(xiàn)計(jì)算樣品中大白鼠類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)濃度。


Elisa試劑盒注意事項(xiàng)

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可運(yùn)用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗刷液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗刷時(shí)不影響成果。

3.各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器,并常常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦運(yùn)用排槍加樣。

4. elisa試劑盒請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做規(guī)范曲線(xiàn),做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 值大于規(guī)范品孔孔的 OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋必定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。



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