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特殊的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)是什么?

2011/4/27 [1315]

特殊的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)是什么?

下面是關(guān)于這類特殊蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)的介紹:
①生物素標(biāo)記蛋白標(biāo)準(zhǔn)
未染色的Marker在做Western時(shí),需要在印跡前先用麗春紅或者是SYPRO熒光蛋白染色液等不干擾Western Blot的染色方法顯色,在膠上做標(biāo)記zui后才能“拼”在zui后的結(jié)果中,如果是預(yù)染的Marker就要在轉(zhuǎn)膜后標(biāo)記膜,或者剪膜,zui后在“拼上”。要是想直接將Marker結(jié)果顯示在zui后結(jié)果上,不用手工作圖或者拼接,那就要Western的Marker了。比如生物素標(biāo)記的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。這種方法主要是配合化學(xué)發(fā)光法:在蛋白分子量上標(biāo)記生物素,通過帶有抗生物素的抗體或者偶聯(lián)鏈親霉素的抗體,在化學(xué)發(fā)光檢測到目的蛋白帶時(shí)就可以同時(shí)看到相應(yīng)的分子量標(biāo)準(zhǔn)一起發(fā)光顯影了。不同于普通蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)的便宜、預(yù)染蛋白分子量的方便,這一方法的優(yōu)點(diǎn)是與Marker和目的蛋白對應(yīng)性好,同時(shí)在同張片上顯示,不用拼接,利于分析。缺點(diǎn)是如果樣品中帶有生物素背景,那個(gè)抗生物素抗體有可能影響結(jié)果,而且反應(yīng)體系太過復(fù)雜也會干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
②特殊標(biāo)記蛋白標(biāo)準(zhǔn)
在經(jīng)過修飾的蛋白標(biāo)準(zhǔn)中,除了生物素標(biāo)記以外,近些年由于下游蛋白操作的豐富化與復(fù)雜化,也出現(xiàn)帶有“尾巴”的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。比如His-Tag,如果每個(gè)Marker條帶都有His –tag,那二抗添加His-Taq抗體很容易將Marker條帶顯示在Western結(jié)果上。

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